农药残留胶体金检测卡的操作看起来简单——"滴上去等结果"，但每一步都有技术要点。取样部位不对，可能漏检；提取时间不够，可能假阴性；稀释倍数选错，可能直接无效。本文以百菌清和多效唑两种典型检测卡为例，将胶体金法检测步骤逐环节拆解，从取样到判读给出完整操作规范。
一、检测前准备
| 检查项 | 检查内容 | 异常处理 |
|---|
| 检测卡 | 铝箔袋是否完整，是否在有效期内 | 破损或过期更换 |
| 稀释液 | 是否浑浊、有无沉淀、有无异味 | 异常则更换 |
| 离心管 | 是否有裂纹、是否干净 | 更换 |
| 移液器 | 量程是否匹配、吸头是否齐全 | 提前准备 |
| 工作环境 | 温度15-30℃，避免阳光直射 | 调整环境 |
检测前记录以下信息：
样品名称、来源、批次号
取样日期和时间
检测卡批号
检测人姓名
建议：使用仪器判读模式时，上述信息可在仪器中直接录入，与检测结果自动关联。
取样的核心目标是代表性——取到的样品应能反映该批次整体的农药残留水平。
| 原则 | 说明 |
|---|
| 多点取样 | 同一批次至少取3个不同位置/个体的样品混合 |
| 取可食部分 | 去除不可食部分后再取样 |
| 重点部位 | 农药残留浓度高的部位优先取样 |
| 基质 | 取样部位 | 取样量 | 关键要点 |
|---|
| 叶菜类（大白菜、菠菜等） | 可食叶片部分 | 2g | 叶面残留高，不要只取内部叶片 |
| 茄果类（番茄、辣椒等） | 果皮及皮下果肉 | 2g | 农药主要附着于表皮 |
| 瓜类（黄瓜、苦瓜等） | 果皮及皮下果肉 | 2g | 同上，去皮部分残留大幅降低 |
| 根茎类（胡萝卜、马铃薯等） | 横截面或表皮 | 4g | 残留集中于表皮，横截面更具代表性 |
| 中药材鲜品（麦冬、三七等） | 根/块根部分 | 2g | 多效唑在根茎类累积，取块根 |
| 中药材干品（麦冬干、人参等） | 干燥品粉碎后取样 | 2g | 必须粉碎，否则提取不充分 |
| 茶叶 | 干燥茶叶 | 2g | 直接取用，无需额外处理 |
| 谷物（稻谷、小麦） | 颗粒粉碎后取样 | 2g | 需粉碎再提取 |
统一要求：将样品剪成1cm左右见方的碎片。
实操提醒：样品碎片大小影响提取效率，太大提取不充分（假阴性），太碎可能引入过多基质干扰。1cm见方是经验最佳值。
| 步骤 | 操作 | 要点 |
|---|
| 1 | 取2g样品（根茎类4g）放入50mL离心管 | 使用电子天平称量，确保准确 |
| 2 | 加入5mL专用稀释液 | 不同检测卡稀释液不同，不可混用 |
| 3 | 震荡2分钟 | 见3.2节详解 |
| 4 | 静置5分钟 | 使固液分层，取上清液 |
| 方式 | 操作 | 适用场景 | 提取效果 |
|---|
| 交替摇晃（现场模式） | 手持离心管上下交替摇晃2分钟 | 无设备环境 | 基本满足，但均匀性稍差 |
| 振荡器震荡（实验室模式） | 将离心管固定于振荡器，2000rpm震荡2分钟 | 有设备环境 | 提取更均匀充分 |
实验室模式下，震荡后增加离心步骤：
离心转速：4000rpm
离心时间：2分钟
效果：上清液更澄清，减少颗粒物对层析的干扰
是否必须离心？ 不是必须，但高干扰样品（茶叶、高油脂样品）强烈建议离心，可显著降低检测失败率。
稀释是不同
| 干扰类型 | 代表样品 | 干扰机制 | 处理方式 |
|---|
| 高油脂 | 花生仁、菜籽油 | 油脂阻塞NC膜微孔，层析中断 | 高倍稀释 |
| 高糖分 | 荔枝 | 糖分增加液体粘度，层析变慢 | 适度稀释 |
| 高果胶 | 苹果 | 果胶影响抗体活性 | 适度稀释 |
| 高色素 | 茶叶 | 色素干扰T线/C线颜色判读 | 稀释+仪器判读 |
| 低干扰 | 大豆、杧果 | 基质干扰小 | 免稀释 |
百菌清胶体金检测卡：所有基质均无需额外稀释，提取后上清液直接检测。
多效唑胶体金检测卡：根据基质不同，分为三档：
| 稀释档位 | 适用基质 | 操作 |
|---|
| 不稀释 | 大豆、菜用大豆、杧果 | 提取上清液直接检测 |
| 4倍稀释 | 油菜籽 | 100μL样品液 + 300μL稀释液 |
| 10倍稀释 | 稻谷、小麦、花生仁、菜籽油、苹果、荔枝 | 100μL样品液 + 900μL稀释液 |
先提取再稀释：稀释是在提取完成后进行的二次操作，不是在初始提取时多加稀释液
使用移液器：100μL、300μL、900μL的量取必须使用微量移液器，不可目测估算
混合均匀：样品液与稀释液混合后轻轻吹打2-3次，确保混匀
稀释后灵敏度换算：
| 稀释倍数 | 灵敏度换算 | 说明 |
|---|
| 不稀释（1倍） | 50ppb | 原始灵敏度 |
| 4倍稀释 | 200ppb | 灵敏度降低4倍 |
| 10倍稀释 | 500ppb | 灵敏度降低10倍 |
重要提醒：选择稀释方案时，需同时考虑"基质干扰"和"灵敏度是否仍覆盖限值"两个因素。例如多效唑检测麦冬（限值0.1mg/kg=100ppb），只能使用不稀释方案（50ppb），10倍稀释后灵敏度500ppb已无法覆盖。
| 步骤 | 操作 |
|---|
| 1 | 将检测卡平放在桌面 |
| 2 | 用移液器取100μL待测液（或滴加约3滴） |
| 3 | 将待测液滴入检测卡上的加样孔（S孔） |
| 4 | 等待层析启动（液体向吸水垫方向移动） |
| 检测卡 | 判读时间 | 说明 |
|---|
| 百菌清胶体金检测卡 | 6-8分钟 | 较快显色 |
| 多效唑胶体金检测卡 | 10-15分钟 | 需更长时间层析 |
严禁：提前判读（反应未完成）或超时判读（假阳性率上升）
三条规则，适用于所有胶体金竞争法检测卡：
| 结果 | 判断标准 | 含义 |
|---|
| 阴性（-） | C线显色，T线颜色深于或等于C线 | 未检出或低于灵敏度 |
| 阳性（+） | C线显色，T线不显色或颜色浅于C线 | 检出，含量≥灵敏度 |
| 无效 | C线不显色 | 检测失败，需重做 |
核心逻辑：C线是"检测是否正常"的质控线，C线不显色 = 本次检测不可信。
搭配农药残留检测仪（如冠宇仪器GY-PR-0704TC）：
将检测卡插入仪器卡槽
仪器自动读取T线和C线的光密度值
计算T/C比值，与预设阈值比较
自动输出阴性/阳性判断
结果自动存储，支持数据导出
仪器判读的优势：
胶体金检测卡为初筛工具，阳性结果的处理流程：
记录阳性样品信息
同一样品重新取样，用新检测卡复测一次
复测仍为阳性，送实验室采用国标方法（GC或LC-MS/MS）确证
以实验室确证结果作为最终判定依据
本文为农药残留胶体金检测技术系列文章第二篇，下一篇将详细讲解检测步骤中的注意事项与常见问题。更多农药残留快检技术资料，欢迎关注冠宇仪器技术专栏。
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更新时间：2026-05-12
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